タンパク質間相互作用を研究するためにどのような方法を使用できますか？
1。共免疫沈降（Co-IP） ：Co-IPは、タンパク質間相互作用を研究するための広く使用されている技術です。それは、餌タンパク質に特異的な抗体を使用して、細胞溶解物からの1つのタンパク質（baitタンパク質）の免疫沈降を伴います。次に、免疫沈降タンパク質複合体を分析して、餌タンパク質と相互作用する他のタンパク質（獲物タンパク質）を同定します。 Co-IPに続いて、ウエスタンブロッティング、質量分析、免疫蛍光染色などのさまざまな下流分析方法が続くことができます。
2。プルダウンアッセイ ：プルダウンアッセイは、アフィニティクロマトグラフィーの原理に基づいています。ベイトタンパク質は、タグとの共有結合または融合（GSTやHISタグなど）を介して、固体サポート（磁気ビーズやアガロース樹脂など）に固定されています。次に、細胞溶解物または精製タンパク質混合物を、固定化された餌タンパク質とインキュベートします。洗浄して非結合タンパク質を除去した後、相互作用するタンパク質（獲物タンパク質）が溶出して分析されます。
3。蛍光共鳴エネルギー伝達（FRET） ：FRETは、2つの密接な間隔のフルオロフォア（ドナーとアクセプター）間のエネルギーの移動を測定する技術です。ドナーとアクセプターのフルオロフォアが近接している場合（通常は10〜100Å以内）、ドナーフルオロフォアの励起により、アクセプターフルオロフォアによる光が発光されます。このエネルギー移動は定量化し、タンパク質間相互作用を監視するために使用できます。 FRETは、特定のフルオロフォアを備えたタンパク質の標識や、遺伝的にコードされた蛍光タンパク質（GFPやRFPなど）を使用するなど、さまざまな方法で実装できます。
4。生体分子相互作用分析（BIA） ：Surface Plasmon Resonance（SPR）としても知られるBIAは、ガラススライドと流れる液体の界面での屈折率の変化を測定するラベルフリーの手法です。相互作用するタンパク質の1つはガラス表面に固定され、もう1つのタンパク質は表面に通過します。タンパク質間の相互作用は、屈折率の変化につながり、検出および定量化できます。 BIAは、タンパク質間相互作用の結合親和性と速度論に関する情報を提供できます。
5。等温滴定熱量測定（ITC） ：ITCは、2つの分子間の相互作用に関連する熱変化を測定する手法です。タンパク質が相互作用すると、熱は放出（発熱）または吸収（吸熱）のいずれかです。 ITCは、タンパク質間相互作用の結合親和性（KD）とエンタルピー変化（ΔH）やエントロピー変化（ΔS）などの熱力学的パラメーターを定量化できます。
6。タンパク質相互作用アレイ ：タンパク質相互作用アレイには、マイクロアレイ形式でのタンパク質間相互作用のハイスループットスクリーニングが含まれます。数千の異なるタンパク質またはペプチドが固体表面に固定されており、目的の特定のタンパク質の結合は、標識抗体またはその他の検出方法を使用して検出されます。この手法により、タンパク質間相互作用の迅速かつ大規模な分析が可能になります。
7。酵母2ハイブリッド（Y2H）アッセイ ：Y2Hアッセイは、酵母細胞のタンパク質間相互作用を特定するために使用される遺伝的方法です。 2つのタンパク質のコーディングシーケンスを、転写因子の2つの異なるドメインに融合することが含まれます。 2つのタンパク質が相互作用すると、転写因子が再構成され、レポーター遺伝子の発現につながります。陽性相互作用は、選択的な培地または比色アッセイでの酵母細胞の成長に基づいて特定されています。
タンパク質間相互作用を研究する方法の選択は、目的の特定のタンパク質、試薬と機器の利用可能性、および望ましいレベルの情報に依存します。これらの技術の組み合わせを使用して、タンパク質間相互作用に関する包括的な洞察を得ることもできます。