カタラーゼ濃度を測定する方法

カタラーゼは生物学的（有機）触媒です。この酵素は、知られている最も強力な触媒の1つであり、人体に有益な効果があり、生命に重要です。カタラーゼは、過酸化水素の分解を加速する際に触媒として作用します。過酸化水素は、除去されないと細胞に有毒な代謝副産物です。カタラーゼは、過酸化水素を水と酸素に分解するのに役立ちます。カタラーゼはまた、フェノール、形成酸、ホルムアルデヒド、アルコールなどの他の毒素の酸化を助けます。

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必要なもの

• リン酸緩衝液中の2つの110 mlのクロモゲン
• 300μl基質-30％過酸化水素
• 400μl.hrp-リン酸緩衝液中の西洋ワラディッシュペルオキシダーゼ
• 60 mlリン酸緩衝液
• 250 mlリン酸緩衝液中のサンプル希釈液界面活性剤
• 2つの30 ml基板希釈リン酸緩衝液
• 2つの30 ml停止試薬-azidiumナトリウム
• 2つのバイアル160 U/バイアル標準カタラーゼ
• 分光光度計
• 10μl調整可能なピペット
• 1 cm経路長分光測定キュベット
• 1.5 mLポリプロピレン微小管をcap
• テストチューブ-12x75ミリメートル（各2.5 ml）
• タイマー
• 脱イオン水

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手順

1. • 1

     50ミリリットル（ML）バイアルのカタラーゼ濃度に200マイクロリットル（μL）脱イオン水を加えて測定するカタラーゼのストックを準備します。カタローズ濃度のレベルは、1ミリリットルあたり160単位（U/ml）でなければなりません。

   • 2

     30μlの希釈カタラーゼをチューブに加えます。 500μLの基質（過酸化水素-10mmH2O2）を各チューブに加えます。それを使用するときに過酸化水素をたたまないように注意してください。

   • 3

     各チューブを室温で1分間インキュベートします。

   • 4

     各バイアルに500μLの試薬を加えます。各バイアルをキャップし、バイアルを上下に反転させて混合します。混合物を渦巻かせたり、バイアルを振ったり、オブジェクトでかき混ぜないでください。

   • 5

     各反応混合物をテストチューブに20μlします。 HRP試薬の2ミリリットルを各試験管に加えます。繰り返しますが、テストチューブを数回反転させて溶液を混ぜます。

   • 6

     溶液をもう一度インキュベートします。今回は室温で10分間。

   • 7

     分光光度計で溶液の吸光度レベルを読んでください。分光光度計は、光波長を測定して、どの物質が存在するか、どの濃度を正確に決定します。この方法は、カタラーゼ濃度の正確な読み取り値を提供します。この情報は、この実験のように、カタラーゼと過酸化水素と過酸化水素の相互作用のコンテキストで有用であり、人体で自然に起こるように。