セラムを使用してウエスタンブロットを実行できますか?

セラムを使用してウエスタンブロットを実行することは可能ですが、一般的には推奨されません。血清は、目的の特定のタンパク質の検出を妨げる可能性のある細胞を含む細胞とタンパク質を含む複雑な混合物です。さらに、血清には高いバックグラウンド信号を持つことができ、低積立タンパク質を検出することを困難にすることができます。これらの理由から、精製されたタンパク質サンプルは通常、ウエスタンブロットで使用されます。

ただし、特定の場合は、ウエスタンブロッティングに血清を使用することが必要または有利な場合があります。たとえば、目的のタンパク質が精製されたタンパク質サンプルの存在量が少ない場合、血清を使用するとタンパク質が検出される可能性が高くなる可能性があります。さらに、血清を使用して、タンパク質間相互作用を研究したり、特定のタンパク質に対する抗体を検出したりすることができます。

セラムをウエスタンブロッティングに使用する必要がある場合、干渉信号とバックグラウンド信号の可能性を最小限に抑えるための措置を講じることが重要です。これらの手順には以下が含まれます。

*細胞の破片と不溶性粒子を除去するための遠心分離により、血清サンプルを準備します。

*干渉物質の濃度を減らすために、血清サンプルを希釈します。

*ウシ血清アルブミン(BSA)などのブロッキング剤を使用して、非特異的相互作用を最小限に抑えます。

*背景信号を減らすために、抗体濃度やインキュベーション時間などのウエスタンブロット条件を最適化します。

全体として、干渉信号とバックグラウンド信号の可能性があるため、一般的にウエスタンブロッティングに血清を使用することは推奨されませんが、特定の場合には必要または有利な場合があります。セラムを使用する場合、ウエスタンブロット条件の慎重な最適化が不可欠です。

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